Hla типирование

Встречаются случаи, когда и женщина, и мужчина вполне здоровы, но беременность не наступает. Иногда это связано с их биологической или иммунологической несовместимостью, выявляемой при помощи специальных проб, причем некоторые из них направлены на выявление совместимости только с мужем (посткоитальный тест или проба Шуварского), другие — с мужем и донором (проба Курцрока-Миллера).

Посткоитальный тест проводят как можно ближе к моменту овуляции. Следует воздерживаться от половой жизни в течение как минимум 2 дней до проведения теста. Половое сношение рекомендуют в ночь накануне проведения теста, примерно за 9 — 12 часов до визита в клинику. Нельзя пользоваться вагинальной смазкой, подмываться и принимать ванну после полового акта.

Для проведения теста из шейки матки с помощью тонкого катетера берут немного цервикальной (шеечной) слизи, которую исследуют под микроскопом. Тест считается положительным, если через 9-24 часа после полового акта в слизи обнаруживаются живые подвижные сперматозоиды. В случае отрицательного результата, т.е. когда слизь «убивает» сперматозоиды, обездвиживая их, говорят о возможном иммунологическом факторе бесплодия.

Посткоитальный тест

При отрицательном результате посткоитального теста его следует повторить. У некоторых женщин тест может быть положительным только 1-2 дня в течение всего менструального цикла. Многие препараты искажают результаты проб на совместимость, поэтому желательно избегать приема гормональных и других средств (например, клостилбегита) в том цикле, когда предполагается проведение проб на совместимость.

Проба Курцрока-Миллера проводится в дни предполагаемой овуляции. Шеечная слизь наносится на предметное стекло и к ней добавляется сперма супруга. На границе их соприкосновения проба оценивается: в случае положительной – видно, что сперматозоиды беспрепятственно двигаются через слизь (Видео 1), в случае отрицательной – они не могут пройти через неё, останавливаясь на границе (Видео 2). Проба Курцрока-Миллера является более надежной, чем проба Шуварского, для оценки совместимости партнеров, и выполняется сейчас намного чаще.

Для преодоления «убийственного» для спермы фактора – шеечной слизи – проводится внутриматочная инсеминация спермой мужа или донора, при который сперматозоиды вводят прямо в полость матки, или ЭКО.

При неудачных попытках родить ребёнка супруги задаются вопросом — в чём причина? Первичные анализы и исследования часто не могут ответить на него. Для выявления проблемы врачи дополнительно назначают HLA-типирование пары. Иммунологическая идентичность родителей становится серьёзным препятствием на пути к рождению ребёнка.

Актуальность генетических анализов

Генетические анализы — наиболее современный метод выявления заболеваний и отклонений у человека

Вся информация о человеке, его особенностях развития, склонностях к заболеваниям зашифрована в молекуле ДНК. В настоящее время существуют сотни генетических тестов, позволяющих быстро выявить причину отклонений в здоровье и даже спрогнозировать их появление в будущем. В пренатальной диагностике такие анализы используются для раннего выявления наследственных заболеваний плода и «совместимости» супругов.

Типы и свойства HLA

HLA (Human Leucocyte Antigens), что в переводе с английского означает человеческий лейкоцитарный антиген, отвечает за реакцию гистологической совместимости. У нас всех есть свой набор HLA-молекул и HLA-генов. Дети получают половину HLA-генов от мамы и папы.

Самыми распространёнными являются «классические» и «неклассические» гены HLA. В данной статье для нас представляют интерес первые, а точнее, HLA II класса, основная функция которых сводится к антигенному распознаванию и межклеточному взаимодействию, обеспечению устойчивости человека к инфекциям. Но у них есть и минусы — они могут стать причиной аутоиммунных заболеваний и проблем во время беременности.

Роль HLA в протекании беременности

Для полноценного вынашивания ребёнка антигены отца и матери должны различаться. Зародыш, сформированный в результате соединения родительских половых клеток, обладает специализированными антигенами, «чужими» для иммунитета матери. Организм женщины реагирует на новые клетки ребёнка включением особых механизмов, защищающих плод: синтезируются антитела-протекторы, подавляющие специализированные NK-клетки-киллеры. Если этого не происходит, последние начинают убивать зародыш, что приводит к прерыванию беременности.

Если антигены отца и матери совпадают, то ребёнок будет носителем антигенов идентичных материнским. В таком случае женский организм считает клетки зародыша своими, а значит, не запускает защитные механизмы для сохранности плода. Иммунитет воспринимает плод как некое опухолевое заболевание и пытается его уничтожить или приостановить деление клеток. В обычной жизни это спасает нас от многих заболеваний, но в этом случае становится причиной некроза в тканях зародыша и приводит к выкидышу.

Комплекс гистосовместимости оказывает влияние на сам процесс оплодотворения, прикрепление зародыша и вынашиваемость плода. Существует прямая зависимость: чем больше аллелей HLA-генов оказалось схожим у супругов, тем больше риск выкидыша. Около 35% пар с повторяющимися случаями выкидыша имеют по 2–3 совпадения. Если обнаружено четыре и больше сходных аллелей, то невынашиваемость и безуспешные попытки ЭКО будут почти во всех случаях.

Для полноценного вынашивания плода очень важно не только количественное совпадение у родителей, но и сами аллели HLA-генов у каждого из супругов. Так, в парах с тремя и более выкидышами при расшифровке результатов NLA-типирования выявлено увеличение числа некоторых аллелей: у женщин – DQB1 0301, 0501, 0602; у мужчин – DRB1 10, 12; DQA1 0102, DQA1 0301, 0102; DQB1 0501, 0602. При повторяющихся выкидышах уменьшается частота аллелей DRB1 03 и DQB1 0303 как у женщин, так и у мужчин, что говорит об их защитном эффекте на течение беременности.

Показания к HLA-типированию

HLA-типирование не является стандартной процедурой при беременности. Этот тест назначают только в случаях с постоянным невынашиванием плода и при повторяющихся неудачах экстракорпорального оплодотворения.

Его проведение иногда рекомендовано только отцу, т. к. некоторые варианты антигенов приводят к отклонениям во время сперматогенеза и отрицательно сказываются на качестве половых клеток, что влияет на развитие плода.

Метод проведения

Полимеразная цепная реакция — высокоточный метод молекулярно-генетической диагностики

Для проведения генетического анализа супруги должны сдать кровь из вены. Из собранного материала будут выделены лейкоциты. Анализ проводят методом цепной полимеразной реакции (ПЦР). Врач-генетик на основе полученных результатов будет устанавливать степень иммунологической совместимости родителей.

Расшифровка результатов

В данном варианте у супругов 3 совпадения по вариантам HLA-антигенов

Полная иммунологическая несовместимость устанавливается, если у пары получен высокий процент совпадений (пять и более из шести возможных в трёх локусах, имеющих по 2 варианта в каждом из локусов) среди генов DRB1, DQA1, DQB1. При частичной несовместимости результат не может быть назван главной причиной выкидышей. Полное несовпадение партнёров — положительный результат, идеальный для беспроблемного протекания беременности.

Иммунотерапия при совпадении анализов в паре

Методы сохранения беременности при иммунологической идентичности родителей были придуманы несколько десятилетий назад. Один из способов — вшивание ткани отца беременной женщине. Иммунитет начинал атаковать не плод, а инородные ткани. В дополнение проводилась чистка крови и подавление иммунитета матери.

Иммунизация — самый распространённый метод борьбы с HLA-идентичностью супругов

Сейчас возможны другие варианты поддержания беременности и защиты плода. После получения результатов лечащий врач может порекомендовать использовать иммунизацию. Существует два вида иммунизации — активная и пассивная.

  1. При активной женщине вводятся концентрированные лимфоциты супруга. Таким образом, организм будущей матери постепенно учится узнавать клетки мужа. Некоторые исследования приводят данные о 60% положительных результатов при вовремя проведённой процедуре.
  2. Пассивная иммунизация проводится специальными препаратами иммуноглобулинов (Октагам, Интраглобин, Иммуновенин и др.) Начинается процедура до зачатия, длится два — три месяца. Затем прописываются поддерживающие беременность курсы. Этот метод используется при экстракорпоральном оплодотворении.

Типирование HLA-генов супругов (видео)

Генетический анализ на HLA-антигенную совместимость супругов поможет выяснить, является ли бесплодие или невынашивание следствием генетической несовместимости пары. В случае подтверждения диагноза не теряйте надежду: современная медицина зачастую способна решить эту проблему и помочь в появлении на свет здорового малыша. Иммунизация матери является распространённым методом борьбы с генетической идентичностью родителей по HLA-антигенам.

  • Екатерина Сергеевна

Высшее образование в сфере биологии (СПбГУ, магистр биологии), специализация — генетика человека.

«Инвитро» и Русфонд (Российский фонд помощи) подвели итоги первого года совместной работы.

В результате этого сотрудничества в Национальный регистр доноров костного мозга имени Васи Перевощикова вступили 13 685 человек. Переоценить проделанную работу сложно. Ведь каждый из включенных в регистр добровольцев может оказаться единственным шансом на спасение тяжелобольных людей, нуждающихся в трансплантации костного мозга. Партнеры намерены продолжать совместную работу и приглашают жителей России активнее вступать в ряды доноров.
Ежегодно в России выполняется порядка 1 500 пересадок костного мозга, тогда как нуждаются в манипуляции, по данным Минздрава, более 5 000 человек. Такая ситуация сложилась в том числе из-за дефицита доноров костного мозга. Для многих больных не удается найти совместимых доноров ни в России, ни за рубежом.
Понимая остроту проблемы, «Инвитро», крупнейший частный российский холдинг, специализирующийся на лабораторной диагностике и медицинских услугах, а также Русфонд объединили усилия, чтобы исправить ситуацию.
В сентябре 2018 года был подписан договор о сотрудничестве. И уже 1 октября 2018 года все медицинские офисы «Инвитро» по всей России начали принимать добровольцев. За год работы Национальный регистр доноров костного мозга имени Васи Перевощикова пополнился 13 685 людьми. Это серьезный вклад, учитывая, что всего в России зарегистрировано чуть больше 110 000 добровольцев.
Александр Островский, генеральный директор и основатель «Инвитро»: «Путь человека в доноры должен быть максимально простым и коротким. Наша сеть состоит почти из 1 500 медицинских офисов и охватывает большинство крупных городов России. То есть, «Инвитро» способна стать всероссийским шлюзом по приему добровольцев. Это важная, но все же механическая сторона вопроса. Главное, что мы четко понимаем острую необходимость расширения Национального регистра доноров. Это амбициозная и благородная задача, в решении которой «Инвитро» готова активно участвовать».
Анна Андрюшкина, генеральный директор Национального РДКМ, отметила: «Сотрудники «Инвитро» не просто берут кровь у тех, кто уже принял решение стать донором, но и агитируют, информируют, привлекают добровольцев, рассказывают посетителям лабораторий о донорстве костного мозга и о том, для чего нужен регистр. Многие сотрудники «Инвитро» и сами уже стали потенциальными донорами. Наша задача информировать как можно больше людей о необходимости создания собственного регистра, который бы учитывал национальный и этнический состав населения страны. Впереди большой путь, и мы рады, что на этом пути «Инвитро» с нами».
Каждый из потенциальных доноров может спасти человека с онкологическим или наследственным заболеванием, который нуждается в пересадке неродственного костного мозга. Шанс найти донора с подходящим генотипом – 1 к 10 000. Поэтому чем обширнее регистр, тем выше вероятность положительного исхода.
«Инвитро» и Русфонд намерены продолжать совместную работу и приглашают жителей России активнее вступать в ряды доноров. Чтобы вступить в регистр, нужно просто сдать кровь на типирование (исследование генов, отвечающих за тканевую совместимость) в любом медицинском офисе «Инвитро». Биообразцы отправляются в специализированную лабораторию, по итогам исследования, данные добровольцев заносятся в Национальный регистр доноров костного мозга имени Васи Перевощикова.
С полным списком медицинских офисов можно ознакомиться на сайте . Получить консультацию по сдаче крови на типирование можно по телефону: 8 (800) 200-363-0.

Гены гистосовместимости (тканевой совместимости), или гены HLA II класса — могут определять развитие некоторых заболеваний (гепатит В, инсулинзависимый сахарный диабет (I типа), ревматоидный артрит), а также риск невынашивания (ранней потери) плода при беременности.

Синонимы русские

Типирование генов комплекса тканевой совместимости, локусы генов HLADR, DQ, комплекс человеческих лейкоцитарных антигенов II класса.

Синонимы английские

HLA- DRB1, DQA1, DQB1, HLA II — human leukocyte antigen II, MHC – major histocompatibility complex II.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Буккальный (щечный) эпителий, венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Специальной подготовки к исследованию не требуется.

Общая информация об исследовании

Исследование выполняется с использованием полимеразной цепной реакции с аллельспецифическими праймерами. Учет результатов реакции проводится с автоматически использованием детектирующих амплификаторов в режиме реального времени (RealTime).

Гены гистосовместимости (тканевой совместимости), или гены HLA II класса, расположены на коротком плече 6-й хромосомы и локализованы в несколько генетических кластеров: DRA, DRB, DQA, DQB, DPA, DPB и т.д. Эти гены крайне полиморфны в популяции, например, для локуса DPВ описано около 124 алелей, а для локуса DRB – более 440. Каждый аллель имеет собственный номер в классификации, который идентифицируется при типировании. У каждого человека каждый локус представлен парой генов. Продуктами работы генов являются полипептидные цепи – альфа (от генов с маркером А) и бета (от генов с маркером В). Альфа- и бета-цепи формируют единую функционально активную структуру на поверхности клеток – HLA-молекулу II класса. Эти молекулы преимущественно экспрессированы на так называемых профессиональных антигенпрезентирующих клетках, к которым относятся макрофаги, дендритные клетки и В-лимфоциты. Эти клетки, используя HLA-молекулы II класса, участвуют в генетическом контроле практически всех иммунных реакций, способствуя их развитию или нарушая их. Нарушение функций иммунной системы является важнейшей составляющей большого количества заболеваний (онкологических, воспалительных и дистрофических). Выраженные нарушения реализуются в патологическое состояние с клиническими признаками. Таким образом, спектр и специфичность HLA молекул II класса определяют развитие определенных заболеваний. Необходимо отметить, что спектр этих молекул не является «гарантией» проявления патологического процесса, а только лишь определяет риск его развития.

В клинической практике существуют два показания для данного исследования.

1. Расчет риска развития заболеваний в группах риска. Например, носители аллеля HLA-DRB1*1302 имеют повышенную способность к элиминации вируса гепатита В. Высокий риск развития инсулинзависимого сахарного диабета (I типа) связан с наличием аллелей DQ8 и DQ2. Причем наличие обоих этих аллелей увеличивает риск развития заболевания. Наличие в генотипе аллеля DR4 является фактором риска развития ревматоидного артрита, а наличие у этих пациентов аллеля DR2, наоборот, оказывает защитный эффект.

2. Оценка риска невынашивания (ранней потери) плода при беременности.

HLA-типирование используют для диагностики причин невынашивания беременности и бесплодия. При репродуктивных нарушениях важно количество совпадений вариантов генов HLA II класса у супругов: чем их меньше, тем выше вероятность наступления беременности.

Согласно последним данным, исследование совпадений генотипов локусов HLA не входит в перечень рекомендаций при привычной потере беременности в связи с противоречивой информацией и отсутствием прогнозирования в лечении. Оценка значимости данного анализа в конкретной паре должна проводиться врачом-специалистом.

Выбор метода лечения осуществляется только врачом-иммунологом или репродуктологом на основании результатов полноценного обследования супружеской пары на все иммунологические причины нарушения фертильности.

Существуют также и другие показания к данному исследованию, например поиск донора при трансплантации костного мозга или поиск донора крови и ее компонентов для гипериммунизированного пациента. Однако эти исследования проводятся специализированными клиническим учреждениями.

Стоит также отметить, что заключение по степени риска развития заболевания или степени риска нарушения репродуктивной функции должно осуществляться только совместно с врачом-генетиком.

Для чего используется исследование?

  • Для выявления предрасположенности к развитию заболеваний:
    • аутоиммунный тиреоидит,
    • сахарный диабет 1 типа,
    • системная красная волчанка,
    • аутоиммунный гепатит,
    • первичный билиарный цирроз,
    • целиакия,
    • хроническая идиопатическая крапивница
  • При планировании семьи (оценка риска бесплодия).

Когда назначается исследование?

  • Однократно, в комплексной диагностике заболеваний.

Что означают результаты?

Полученные результаты не являются диагнозом, но необходимы для расчета степени риска развития патологии. Степень риска может рассчитать только специалист-генетик. На основании полученной информации лечащий врач может сделать клинические заключения в отношении диагноза, дальнейшего обследования и коррекции терапии.

Что может влиять на результат?

Лейкопения ниже 0,5х109, вызванная гематологическим заболеванием или приемом лекарственных препаратов (цитостатиков).

Важные замечания

Для данного маркера не существует понятия «норма» и «патология», т. к. исследуется полиморфизм гена.



Также рекомендуется

Дополнительные исследования могут быть назначены врачом после постановки клинического диагноза.

Кто назначает исследование?

Врач-генетик, акушер-гинеколог, репродуктолог.

Литература

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *